随着细胞治疗行业的迅速发展，稳定且可重复的诱导多能干细胞（iPSC）扩增已成为推动治疗进程的关键因素。通过系统化的生物过程设计，识别并优化关键过程输入变量（PIV），实现了iPSC在PBS垂直轮反应器中的稳健性与可重复性，这不仅降低了生产成本与周期，更为大规模生产与临床应用提供了强有力的保障。

iPSC及其衍生特化细胞的生产流程复杂且漫长，涉及多个相互依赖的工艺输入变量。在临床应用中常需上亿个iPSC衍生细胞，故大规模生物反应器变得不可或缺。然而，运营大规模反应器的费用昂贵，因此，首先需开发在小规模（100-500mL）下既可重复又稳健的过程。

在此背景下，PBSBiotech通过使用微型化的垂直轮生物反应器（PBS-01和PBS-05Mini），成功建立了一套标准化的iPSC扩增工作流程。该流程不仅展现出极高的稳健性与可重复性，还能轻松扩展至PBS-15，进一步降低开发成本并提升生产效率，为iPSC生产带来了可靠工具。

现阶段，iPSC制造领域缺乏详细的实验方案和标准化的结果报告，使得不同实验室之间在iPSC培养方法上很难进行有效的对比。尤其是在三维悬浮培养方面，尽管已有研究报告了一些细胞生长性能指标，如倍增时间和最大细胞密度，但这些指标存在显著差异，缺乏一致性。因此，通过系统化研究关键工艺输入变量，PBSBiotech开发出了一套基线iPSC扩增协议（baseline protocol），旨在确保实验的可复制性与稳健性，并实现了良好的结果一致性与可靠性。

该基线协议已在两个iPSC细胞系上经过多次验证，涵盖了不同操作员及细胞培养基，适用于聚集体与微载体培养。同时，关于细胞培养的详细协议可从相关文献中找到，且生长性能指标方程亦有发布。

在iPSC聚集体悬浮培养中，关键的工艺输入变量如拟胚体的大小与密度，对自然杀伤免疫细胞的生成至关重要。虽然最佳的EB大小与密度尚未确定，但这些PIV可以通过调整生物反应器的搅拌速率和培养基更换策略来有效控制与表征。

通过使用相同的关键工艺输入变量，将工作体积从PBS-01的100mL扩展至PBS-15的10L，成功实现iPSC生长性能的一致性。在实验中，各种喂养策略得以应用，确保了细胞生长曲线的一致与可重复。

为了获得可重复的实验结果与功能性细胞，需使用能够模拟体内环境的培养基质。其中，泛亚电竞的全长Biolaminin蛋白在此过程中发挥了重要作用。BioLamina品牌的Biolaminin521在培养多能干细胞及其分化细胞方面的有效性已得到广泛认可。Laminin-521是一种经过人重组的全长层粘连蛋白，能够支持iPSC良好附着与增殖，同时维持其多能性，且不含动物成分，更加符合临床应用标准。

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